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LAMP方法在食品微生物检测中的应用
摘 要：近年来微生物食品中毒事件发生率不断增长,因此建立完善的食品安全监管体系,找到一种可靠的食品微生物检测办法至关重要.LAMP法是在21世纪初期开发出来的恒温、连续性的新型核酸扩增方法,在食品微生物检测中发挥着重要作用.本文对LAMP方法在食品微生物检测中的应用进行了分析与探讨.
关键词：LAMP；食品微生物检测；应用
一、LAMP技术原理
LAMP法是在2000年所开发出来的方法,是对靶基因设计出来的特殊内外引物,利用链置换DNA聚合酶,在恒温条件下开启循环链置换反应,在靶标DNA区域启动互补链合成,在同一链上互补序列,通过多次反复形成有很多环花椰菜结构茎环DNA混合物.在LAMP反应中从NTP析出焦磷酸根离子和反应溶液中的镁离子相结合,从而产生焦磷酸酶,形成乳白色沉淀,加入显色液后即可通过人肉眼观察并判定是否扩增.
二、LAMP方法在食品微生物检测中的应用
大肠杆菌检测.大肠杆菌是可以引起人类发生出血性肠炎的微生物因子,主要是经口传播,虽然大肠杆菌传染病在一些卫生条件良好的国家中已经基本得到控制,但部分地区仍然有大肠杆菌感染问题发生,并受到各国相关部门的高度重视.由于大肠杆菌类型较多、血清复杂,采用常规的检测方法难以对其进行灵敏、快速、准确的全面检测.刘倩瑛等人在食品大肠杆菌检测中采用原位LAMP方法对stx2基因进行检测,采用FIFC标记抗体,在紫外线下照射,经试验研究结果发现,原位LAMP与原位PCR相比,其温和渗透性对细胞损伤较小,且在DNA扩增中可以采用荧光抗体标记.另外还有相关学者发现LAMP方法的背景颜色浅,因此LAMP具有较强的敏感性和特异性,在EHEC检测中较为适用.
沙门氏菌检测.沙门氏菌是导致食物中毒的主要病原菌,其通过水源和污染食品传播,在食物中毒事件中,沙门氏菌病毒是最为常见的一种病原菌,约占细菌性食物中毒事件的50%.当前在沙门氏菌检测中,一般通过生化反应、分离培养、血清学和传统PCR技术等检测方法,程序较为繁琐,且易污染、灵敏度低,不适用于水源和食品卫生监测及流行病学调查.根据刘建成等对疑似被沙门氏菌感染的水样鸡蛋中随机抽取100个样品进行检测,并对其进行分离培养和PCR比较,结果PCR漏检率为10%,而LAMP检出率为100%.因此在沙门氏菌检测中,LAMP方法是一种灵敏、快速的检测方式,也是食品检测的重要方法.
LAMP方法在食品微生物检测中无需特殊仪器设备和试剂,在食品微生物检测和其他领域中都突出其优势,具有较强的特异性、灵敏度和简便性,在临床疾病诊断、食品卫生质量检验等领域都具有广阔的前景.如果未来能开发相应试剂盒,使其成为一种常规的检测方法和检测手段,非常利于对食品安全的保障.
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