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新生猪源沙门氏菌耐药性与耐药基因
摘 要：目的：研究新生猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因.方法：选用改良肉汤半固体培养基、XL74培养基,从150份新生猪源猪肉标本中初筛可疑沙门氏菌,以PCR鉴定沙门氏菌.以K-B法测定新生猪源沙门氏菌的耐药性,并采用PCR扩增技术检测耐药基因.结果：共鉴定出21株新生猪源沙门氏菌,对氯霉素和庆大霉素的敏感性较高,对环丙沙星和链霉素表现为高耐药,耐药基因共5种.结论：新生猪源沙门氏菌耐药现象较为严重.
关键词：新生猪；沙门氏菌；耐药性；耐药基因
1材料与方法
（1）材料.菌株来源：2017年6月~2017年10月抽取某养殖场150份新生猪猪肉样品；药敏质控菌沙门氏菌C79-13及阳性对照菌株.试剂：PCR试剂（北京百泰生物技术有限公司）,实验所需引物系自主合成,药敏纸片（北京兰博瑞生物技术有限公司）,具体包含庆大霉素、复方新诺明、链霉素、环丙沙星、氯霉素、壮观霉素、四环素、诺氟沙星、阿米卡星以及萘啶酸共10种.仪器：DYY-70型号电泳仪、TGL-16G台式离心机、DHP-9048型号恒温培养箱等.
（2）方法.将采集的150份新生猪猪肉样本逐一置于灭菌袋内,加入培养基共同保存.新生猪猪肉样本保存时间不得超出12小时.
细菌分离方法.将样本置于含BPW培养液的无菌密封袋内保存,于37℃条件下摇床过夜.第二天,吸取1mLBPW前增菌液至改良肉汤半固体培养基表面,置于42℃恒温箱内持续培养24小时.培养后从培养基中挑取白色可疑菌落,采用三区划线法进行处理,于37℃条件下继续培养24小时.采用PCR鉴定法鉴定疑似沙门氏菌,以Stn的核苷酸序列设引物.PCR反应条件为：94℃5min预变性处理,保持温度不变,预变性45s后转为55℃条件,持续退火45s；调整至72℃延伸30s,经过30个循环.最后于72℃条件下持续延伸10min.电泳方法选用琼脂糖凝胶,电泳后回收DNA胶,所得产物用于DNA测序.标本血清型鉴定选用玻片凝集法,新生猪源沙门氏菌的药敏试验采用K-B法进行.
2结果
（1）新生猪源沙门氏菌鉴定结果.本组150份新生猪猪肉样本经改良肉汤半固体培养基、XL74培养基两轮筛选后,分离出24株可疑沙门氏菌（表面可见黑色中心,而且周围可见透明晕环菌落）.经PCR鉴定（Stn基因）及电泳产物回收测序后,确定21株沙门氏菌.新生猪源沙门氏菌的分离率为14.00%.
（2）新生猪源沙门氏菌的血清型鉴定结果.21株新生猪源沙门氏菌中,共鉴定出6种血清型,其中肠炎沙门氏菌分离率最高,占比25.14%,其他优势血清型包含徳尔卑血清型（21.25%）和里森沙门菌（13.62%）.
（3）新生猪源沙门氏菌的耐药性.21株新生猪源沙门氏菌的10种抗生素药敏分析结果显示,分离菌对10种抗菌药物的耐药性各不相同：新生猪源沙门氏菌对氯霉素（72.45%）、庆大霉素（68.26%）和壮观霉素（65.28%）的敏感性较高,而对环丙沙星（98.75%）、链霉素（94.23%）和阿米卡星（87.69%）表现为高耐药.其中,3株新生猪源沙门氏菌仅耐1种药物,而18株新生源沙门氏菌耐2种以上抗生素.
（4）新生猪源沙门氏菌的耐药基因.本组10种耐药基因中,有5种经PCR扩增出相应大小的目的片段.其中,磺胺类耐药基因包含sulII和sulI两种,后者检出率最高,为45.62%；喹诺酮类耐药基因以parC为主,检出率为97.46%；氯霉素耐药基因floR为47.26%.
3讨论
沙门氏菌抗原性复杂,耐药性强,沙门氏菌感染为猪安全养殖及食物污染控制带来诸多不便.为了评估新生猪源沙门氏菌的耐药性及耐药基因,本研究将150份新生猪猪肉标本作为研究对象,结果表明：150份猪肉样本分离出21株沙门氏菌,分离率为14.00%.新生猪源沙门氏菌对不同抗生素的耐药程度各不相同,其中高耐药主要包含环丙沙星（98.75%）、链霉素（94.23%）和阿米卡星（87.69%）,而3株新生猪源沙门氏菌仅耐1种药物,其余18株新生源沙门氏菌耐2种以上抗生素.这一结果表明新生猪源沙门氏菌的耐药现象较为明显.
PCR结果显示：磺胺类耐药基因sulII、sulI（45.62%）,喹诺酮类耐药基因parC（97.46%）,氯霉素floR（47.26%）.通过对耐药性及耐药基因的对比发现,新生猪源沙门氏菌的耐药性与耐药基因存在密切关联.
4结论
综上所述,新生猪源沙门氏菌耐药现象较为明显,而且对环丙沙星、链霉素及阿米卡星的耐药性较高.因此,对新生猪的沙门氏菌感染治疗中应慎用上述抗生素.此外,养殖场应加强沙门氏菌的感染预防,一旦发生感染,应遵循交叉用药原则,避免因抗生素滥用导致沙门氏菌耐药率持续增长.
沙门氏菌论文范文结:
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