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青海牦牛牛病毒性腹泻的血清学调查
牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起牛的一种急性、热性传染病[1],牛感染BVDV后主要表现为腹泻,进行性消瘦,脱水,严重的可引起死亡[2].BVDV可以导致免疫耐受和免疫抑制,母畜流产和奶牛产奶量下降,以及生产性能下降,每年都给全球养牛业造成巨大的经济损失[3-4].近几年来,我国BVDV的感染情况日益严重,为了掌握青海牦牛BVDV的感染情况,为青海牦牛BVDV的综合防控提供参考依据,本研究对采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的559份血清样品进行了ELISA抗体检测.现将整个试验过程介绍如下.
1 材料和方法
(1)血清样品来源.2017年3—12月,采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的血清样品共计559份.
(2)试剂与仪器.牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒为美国IDEXX公司产品：ELx800酶标仪为美国BIOtek公司产品.
(3)检测方法.按照牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书操作,首先在96孔酶标板每个孔加入100μL样品稀释液,之后在检测孔加入25μL血清样品,在阳性对照孔和阴性对照孔中各加入25μL阳性和阴性对照血清,加完后在室温下作用90分钟,之后弃去酶标板液体,每孔加入300μL洗液洗5次,最后一次洗完拍干.在每个酶标孔加入100μL酶标抗体,室温下作用30分钟,之后弃去酶标板液体,每孔加入300μL洗液洗5次,最后一次洗完拍干.每孔加入100μL TMB底物,室温下避光10分钟H欧诺个显色,之后每孔加入100μL终止液终止反应,酶标仪在450nm波长读数,记录分析检测结果.
(4)结果判定.按照牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书要求,阴性对照平均值≤0.25,阳性对照平均值一阴性对照平均值≥0.15,试验结果成立,计算检测血清样品的S/P值.公式为S/P等于样品OD值一阴性平均OD值/阳性平均OD值一阴性平均OD值.S/P≥0.3,检测样品为阳性：S/P<0.2,检测样品为阴性：0.2≤P<0.3,检测样品为可疑：可疑样品需要重新检测.
2 结果和分析
试验结果显示,6个规模养殖场和11户散养户均存在BVDV抗体阳性牛,阳性率达100%.共计检测559份样品,阳性样品为202份,平均阳性率为36.14%.其中,6个规模牦牛场的BVDV血清抗体阳性率最高的为47.27%,最低的为16.67%,平均阳性率为34.19%.11户散养户的BVDV血清抗体阳性率最高的为57.89%,最低的为27.78%,平均阳性率为39.42%.散养户与规模牛场相比,无论是最高阳性率还是最低阳性率都高于规模牛场,其中散养户的平均阳性率较规模养牛场高5.23个百分点.因采集血清样品的牦牛养殖场和散养户均未免疫过BVDV疫苗,该抗体阳性表明均由BVDV野毒感染所致.
3 讨论
BVDV是牛群普遍易感的疾病,也是危害养牛业最主重的疾病之一,BVDV抗体普查具有十分重要的意义,通过BVDV抗体普查可以了解牛群BVDV感染情况,由于本病的临床症状不明显,有时还不表现临床症状,在实际生产中常常不易诊断.从青海牦牛的血清BVDV抗体检测结果可以看出,559份血清样品的平均阳性率为36.14%,规模牦牛场的阳性率为34.19%,散养户的阳性率为39.42%,散养户的平均阳性率较规模牛场高5.23个百分点,说明青海牦牛存在严重的BVDV污染,尤其是散养户牛的感染状况更为严重.BVDV感染后可以引起本病在牛群中潜伏感染,也可以引起免疫抑制,虽然牛暂时不发病,但在受到应激刺激或遇恶劣气候时,就可以引发病毒性腹泻的急性感染.建议根据检测结果对牛群进行净化处理,将BVDV抗体阳性的牛逐渐淘汰,更不能留作种用.
BVDV在牛群中的潜伏感染状况常常导致本病很难净化,本病可以通过母牛垂直传播,感染BVDV的母牛会出现产死胎及弱仔现象,严重影响规模养牛场的发展.随着BVDV在我国感染情况的日益严重,各大养牛场都应该对本病引起重视.对BVDV的防治需做到以下几点.首先要加强对新购牛的检疫,最好坚持自繁自养,对引进的犊牛一定要做好BVDV抗体检测工作,只有血清抗体检测显示阴性的方可引进.防治BVDV最有效的手段就是牛群BVDV净化,逐步淘汰阳性牛.其次,加强饲养管理,经常消毒,保持良好的环境卫生.及时清理粪便,保持牛舍通风良好.本病重在预防,发病后目前主要采取对症治疗、及时补液防止脱水等措施.
参考文献：
[1]殷震,刘景华主编．动物病毒学（第二版）[M]．科学出版社,1997,688-690．
[2]蔡宝祥．动物传染病学（第四版）[M]．中国农业出版社,2001,300-301．
[3]王竞晗,李素,何文瑞,等．进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定[J].中国生物制品学杂志,2016,29(3):89-92.
[4]张国华,吴丹丹,周玉龙,等．牛病毒性腹泻病毒黑龙江分离株的分离鉴定[J]．中国预防兽医学报,2015,37(10)：805-807．
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