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致羔羊腹泻大肠杆菌分离培养、药敏试验与鉴定
摘 要：为了确定引起该羊场羔羊腹泻的致病菌,通过分离培养和细菌鉴定确定致病菌为大肠杆菌,药敏试验结果表明米诺环素、氨曲南、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢西叮对该菌的抑制和杀灭效果最好.
关键字：羔羊;大肠杆菌;分离培养;药敏实验
2016年9月,新疆沙湾县某羊场发生以羔羊腹泻为主要症状的急性传染性疾病.对发病死亡1小时内的羊采样2只,共采10个样（肺、肝、脾、肺淋巴和肠淋巴各2份）送研究室.通过分离培养、药敏试验和细菌鉴定等实验,确定为大肠杆菌感染.
1 材料与方法
（1）实验材料.细菌分离培养工具一套、vitek2 compact全自动微生化鉴定系统（法国梅里埃公司制造）；病死羊肺、肝、脾、肺淋巴和肠淋巴采样各2份；普通营养琼脂培养基购自生工生物工程（上海）股份有限公司,液体培养基和血琼脂平板培养基为实验室自制,革兰氏染色液购自珠海贝索生物技术有限公司,药敏片为杭州滨和微生物试剂有限公司2016年8月20日生产的35瓶装常用新药敏纸片.
（2）实验方法.无菌条件下采样分别培养于装有液体琼脂培养基的试管里,接种于绵阳血液平板上,做好记录,最后把试管和血平板放入37℃培养箱培养18小时；无菌条件下选择实验中有明显变化的试管（肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1）,使用移液管抽取60uL分散滴入血琼脂平板上,用消毒棉签涂满平板表面,待平面稍干,用镊子取出药敏片对应编号贴在平板表面相应位置.重复以上操作,最后把平板放入37℃培养箱中培养18小时；细菌鉴定使用仪器为vitek2 compact全自动微生物鉴定系统.无菌操作下挑取试验中（肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1）血平板上培养的菌落移入比色管（先做好登记）中,用移液混匀后比色,调节比色度在0.5~0.63之间,插入革兰氏阴性菌鉴定卡（通过涂片观察检测为革兰氏阴性杆菌）,然后按照细菌鉴定仪的操作进行操作.
2 检测结果分析
（1）细菌分离培养结果.液体培养基培养肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1,整体浑浊,振荡可见云雾状沉淀浮起,静置后沉到试管底部,其他几组不明显.血平板培养肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1,可见圆形凸起、湿润、光滑和半透明的乳白色菌落,β溶血,涂片观察,发现革兰氏阴性无芽孢直杆菌.
（2）药敏试验.通过对肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1药敏实验,结果显示4种病料血平板对米诺环素、氨曲南、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢西叮敏感,对头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、环丙沙星和诺氟沙星中敏,对苯唑西林、青霉素g、红霉素、大观霉素、克拉霉素、万古霉素、克林霉素、氯霉素、四环素、诺氟沙星、环丙沙星、左氧沙星、多粘菌素、复方新诺明、氨苯西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛、氧氟沙星、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、哌拉西林、庆大霉素、阿米卡星和麦迪霉素耐药.
（3）细菌鉴定.通过vitek2 compact全自动微生物鉴定系统对肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1和淋巴1血平板培养菌鉴定,均为大肠杆菌.
3 讨论
经过细菌分离培养、染色镜检和细菌鉴定,判断致病菌为大肠杆菌.对该大肠杆菌进行药敏试验发现,该菌对大部分药物有耐药性,对米诺环素、氨曲南等药物敏感,对头孢唑啉等药物中敏,对苯唑西林、青霉素g等药物耐药.从以上结果可以看出,该菌对大部分药物有耐药性,可能是因为老羊场导致.针对该病禁止滥用药物,用药前应筛选敏感药物.选用较敏感药物治疗或者联合用药,尽量减少耐药性的产生,最好用本羊场分离的大肠杆菌制作的灭活疫苗免疫.平时要注意定期消毒,保持羊场清洁卫生.
基金项目：新农垦科学院引导计划（72yyd201409）
兵团科技攻关计划项目（2016AC018）
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