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两种猪伪狂犬病gB抗体检测方法对比试验
郭慧娟1
王成龙2
（1.新乡县农牧局, 河南新乡
453000；
2.新乡市农牧局, 河南新乡
453000）
[中图分类号] S858.28 [文献标识码] B [文章编号] 1003-1650 (2016)03-0248-01
猪伪狂犬病（Pseudorabies, PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）引起的一种高度接触性传染病[1].猪是本病的主要宿主和传染源,健康猪与病猪、带毒猪直接接触可感染本病.通常引起妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔；初生仔猪出现神经症状,感染率和死亡率可达100%,成年猪感染后多耐过,不发病呈隐性感染,造成长期带毒排毒,成为最危险的传染源,严重影响种猪场生产[2,3].本病广泛分布于世界各地,已有50 多个国家和地区报道该病的流行,给养猪业构成很大威胁.我国自1947 年首次报道该病以来,随着养猪业集约化规模化的发展,已有20 多个省市报道发生了该病,并在许多种猪场呈暴发流行趋势,给我国养猪业造成了巨大的经济损失[4].伪狂犬病病毒属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科猪疤疹病毒I型（Suid Herpesvirus I, SHV-I）,病毒粒子呈圆形或椭圆形外观,核衣壳含病毒基因组DNA和核衣壳蛋白,核衣壳外被一层非晶体状蛋白样结构（tegument）所包裹,病毒粒子最外层是病毒囊膜（envolope）,它是由宿主细胞膜结构衍生而来的脂质双层结构,囊膜上镶嵌有病毒编码的囊膜蛋白,大多是糖蛋白[5-8].α-疱疹病毒中至今已鉴定的糖蛋白有gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN,除gG外其余都是病毒粒子结构成分.目前已对PRV的多种糖蛋白进行了结构和功能的研究,糖蛋白gB是猪伪狂犬病病毒的一种主要糖蛋白,能诱导机体产生中和抗体,是PRV免疫抗体评价的首先蛋白[9].
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 酶标仪M550 型, 购自Bio- Rad 公司; 洗板机ELx50 型, 购自Bio- Tek 公司.
1.1.2 试剂盒 PRV gB-I-ELISA试剂 由河南省农业科学院动物免疫学重点实验室提供,主要成分包括：抗原包被ELISA板2块,抗体稀释液1瓶,辣根过氧化物酶标记的养抗猪IgG 1支,底物A液和B液各1瓶,终止液1瓶；爱德士PRV-gB ELISA试剂盒为美国美国IDEXX公司产品.
1.2 方法
1.2.1 PRV gB-I-ELISA 操作程序按常规间接ELISA方法进行.结果判定：按方法说明书中,阴、阳性血清效价的临界值为0.3,根据标准阳性和阴性对照血清和检测样品的OD450nm吸光值计算被检样品的效价,血清样本抗体效价等于 (样品的OD450nm值 - 阴性对照的OD450nm值) / (阳性对照的OD450nm值 - 阴性对照的OD450nm值) 计算每一份血清效价.当效价≥3.0时判为阳性,效价<0.3时判为阴性.
2 结果与分析
2.1 PRV感染血清检测结果
PRV感染猪血清检测结果见表1.检测350份PRV感染猪血清,IDEXX PRV-gB ELISA和PRV gB-I-ELISA检测均为阳性的血清319头份,均为阴性的有12头份,二者检测结果不一致的有19头份,符合率为94.6%（331/350）.
2.2 PRV免疫血清检测结果
PRV免疫猪血清检测结果见表2.共检测420头份,其中,IDEXX PRV-gB ELISA和PRV gB-I-ELISA检测均为阳性的血清362头份,均为阴性的有23头份,二者检测结果不一致的有35头份,符合率为91.6%（385/420）.
根据两种不同背景的猪血清,用两种ELISA方法检测,总符合率为92.6%（792/855）,说明两种方法检测结果基本一致,所建立的PRV gB-I-ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可以用于评价猪PRV gB抗体.
3 讨论
疫苗免疫我国控制PRV的主要措施,因此检测血清抗体效价,评估免疫抗体水平至关重要.常用的PRV免疫抗体检测方法主要有中和实验（SNT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳胶凝集试验（LAT）等,其中,ELISA被列为国际贸易种PRV抗体检测的指定方法[10-13].本研究团队利用PRV gB蛋白抗原富集区为诊断抗原,成功建立了PRV gB 抗体间接ELISA方法（gB-I-ELISA）,为进一步评价该ELISA方法的性能,本研究通过检测PRV感染血清、免疫血清和临床血清样品,通过与商品化的爱德士PRV gB抗体ELISA试剂盒对比,所研制ELISA方法的特异性和敏感性,二者的符合率为92.6%,可以用于评价猪PRV gB抗体,为PRV免疫抗体监测、母源抗体评估以及免疫程序制定提供参考依据.
狂犬病论文范文结:
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