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血液和尿液中巨细胞病毒DNA的检测
摘 要：目的：分析巨细胞病毒（CMV-DNA）在血液和尿液不同类型标本中的检测的检测研究.方法：选取100 例患者作为研究对象,分为观察组和对照组,每组50 例.观察组采用实时荧光定量聚合酶链反应对４种不同类型的血液标本进行检测.对照组针对３种不同类型的尿液标本的巨细胞病毒 载量进行检测,比较血液和尿液不同类型标本的巨细胞病毒检出率和病毒量的差异.结果：观察组50 例患者血清、全血、血浆和外周血单个核细胞（PBMC）的CMV-DNA 检出率分别为46.5％、81.2％、63.3％和70.2％；全血和PBMC 的CMV-DNA 检出率较高,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）.PBMC 的定量结果较高.对照组50 例患者混合尿、尿上清和尿沉渣的CMV-DNA 检出率分别为73.2％、65.4％和 86.6％,尿沉渣的CMV-DNA 检出率较高,混合尿的定量结果较高.结论：血液和尿液标本的CMV-DNA 检测结果差异较大,在CMV 感染的临床诊疗和监测中使用同一标本类型检测具有重要的临床意义.
关键词：巨细胞病毒；实时荧光定量聚合酶链反应；离心柱法
1.资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2016 年－2017 年高度怀疑为活动性 ＣＭＶ 感染的患者血标本100 例,其 中 1～ ＜8 岁 20 例、8～ ＜25岁 15 例、25～＜80 岁 15 例,其中男性标本占 70％,女性标本占30％.尿标本共50 例,其中 1～ ＜8 岁 20 例、6～＜25 岁5 例、25～＜80 岁25 例,其中男性标本占68％,女性标本占32％.疑似病例为排除其他病原体感染,单独或同时出现非特异性症状和体征、发热、外周血异常淋巴细胞、血小板计数减少、白细胞减少症和丙氨酸氨基转移酶升高等.
1.2 方法
1）血液标本
（１）收集分离胶静脉血标本２ｍＬ,3500ｒ／ｍｉｎ离心5min 分离血清,取200μL 血清备用.
（２）收集乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）抗凝静脉血标本２ｍＬ,取全血２００μＬ备用；
（3）3500ｒ／ｍｉｎ离心被检者 ＥＤＴＡ 抗凝静脉血５ｍｉｎ分离血浆,取２００μＬ血浆备用；
2）尿液标本
（１）收集被检者尿标本,密封送检,混匀取全尿标本200μＬ；
（２）12000ｒ／ｍｉｎ离心被检者尿标本 10ｍｉｎ,分离尿液上清200μＬ；
（３）取 １ｍＬ被检者尿标本12000ｒ／ｍｉｎ离心10ｍｉｎ,弃掉上清后,沉淀加入200μＬ的生理盐水,混匀备用.
２、结果
２.１ 100 例患者不同类型血液标本 ＣＭＶ－ＤＮＡ 检出率比较
100 例高度怀 疑 ＣＭＶ 感染的患者血清、全血、血浆和ＰＢＭＣ的ＣＭＶ－ＤＮＡ检 出率分别为46.5％、81.2％、63.3％和70.2％,全血和 ＰＢＭＣ的 ＣＭＶ－ＤＮＡ 检出率较高,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）.
2.2 100 例不同类型血液标本同时阳性患者ＣＭＶ－ＤＮＡ载量比较ＰＢＭＣＣＭＶ－ＤＮＡ 载量（3.99&plun;0.89）、全血 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载 量（3.73&plun;0.90）与血清ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量（4.10&plun;0.87）、血浆 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量（3.52&plun;0.95）比较,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）.采用 Ｂｌａｎｄ－Ａｌｔｍａｎ图进行一致性评价,结果显示,在96％一致限可信区间内 ＰＢＭＣ分别与血清、血浆和全血进行比较,ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量平均增高0.80、0.50 和0.38,较高的ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量为3.11、2.58 和1.83.
2.3 50 例患者不同类型尿液标本 ＣＭＶ－ＤＮＡ 检出率比较
50 例高度怀疑 ＣＭＶ 感染的患者混合尿、尿上清 和尿沉渣ＣＭＶ－ＤＮＡ检出率分别为73.2％、65.4％和 86.6％,尿沉渣的 ＣＭＶ－ＤＮＡ 检出率最高.
2.4 50 例不同类型尿液标本同时阳性患者ＣＭＶ－ＤＮＡ载量比较
尿上清 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量为（3.89&plun;１.23）,尿沉渣 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量为（4.23&plun;1.35）,混合尿 ＣＭＶＤＮＡ载量为（4.86&plun;1.50）,混合 尿的定量结果较高,混合尿的 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量与尿 上清和尿沉渣比较,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）.Ｂｌａｎｄ－Ａｌｔｍａｎ 图一致性分析显示,在96％一致限可信区间内,ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量平均增高０．63 和0.45,较高的ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量为1.87和1.60.
3.讨 论
本研究结果提示,ＰＢＭＣ 的 ＣＭＶ－ＤＮＡ检出率与病毒载量水平均较其他标本类型高,Ｂｌａｎｄ－Ａｌｔｍａｎ 分析提示在96％一致限可信区间内 ＰＢＭＣ 与血清、全血和血浆间病毒载量差值的绝对值最大为3.34.这种差异会对ＣＭＶ 感染的临床诊疗与监测带来明显影响.所以在临床 ＣＭＶ－ＤＮＡ 血液学感染诊断中,研究者认为分离 ＰＢＭＣ能有效提高病毒浓度,可以较好地发现早期 ＣＭＶ 感染,能预防性地对 ＣＭＶ 感染危险因素的患者进行治疗,达到早期治疗潜伏性 ＣＭＶ 感染的目的.对于尿液标本,本研究择了50 例 高度怀疑ＣＭＶ 感染患者的标本,按照临床上常用的类型,分为混合尿、尿沉渣和尿上清,同样采用离心柱的方法提取 ＤＮＡ.结果显示,混合尿和尿沉渣具有较高的检出率,混合尿的 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量最高；Ｂｌａｎｄ－Ａｌｔｍａｎ分析提示不同类型尿液标本间病毒载量差值最大绝对值为2.66.故在 ＣＭＶ－ＤＮＡ 载量水平动态监测方面考虑选择混合尿有更好的优越性,也提示尿上清中有一定的 ＣＭＶ－ＤＮＡ 拷贝数,采用尿沉渣作为临 床ＣＭＶ 检测标本,可能会存在一定的漏诊率.另外有研究者发现肾脏有间歇性排巨细胞病毒颗粒的特性,所以在用尿液作为 ＣＭＶ 临床检测标本,应多次采集混合尿检测,以减少漏诊率.ＣＭＶ－ＤＮＡ 的检测具有重要临床价值,然而由于目前血液或尿液标本 ＣＭＶＤＮＡ的检测没有统一的前处理规范,标本类型的差异会影响病毒的检出率,同一患者不同类型标本的病毒载量水平也存在差异.因此需要对前处理的过程进行统一和规范,例如在结果报告中注明使用的试剂、提取方法和标本类型等,以保证可比性.
病毒论文范文结:
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