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一株猪链球分离菌的实验室鉴定与防治要点
猪链球菌病是由多种致病性链球菌引起的一种严重危害当前养猪生产的重要细菌类疾病,我国将猪链球菌病定为二类动物疫病.猪链球菌有35个血清型,其中链球2型是最常见、毒力最强的血清型疾病,是严重的人畜共患病.本文将某猪场疑似猪链球病病料中的分离菌,分别进行了革兰氏染色镜检、生化反应试验、玻片凝集试验和药敏试验等研究,最终鉴定该分离菌为猪链球菌,并确定了该菌株的敏感药物,采取科学治疗后有效地控制了疫情.现将实验室检测过程简要介绍如下.
1 病料来源
采集本地区某规模化猪场疑似猪链球菌病病死猪的关节积液及部分组织病料.
2 细菌分离培养及鉴定
无菌工作台内将采集的病料样品用接种环划线接种于含4%牛血清的TSA平板上,37℃恒温培养箱中培养18~24小时,观察平板上的菌落形态,可见圆形、乳白色、表面光滑、边缘整齐且有显著溶血环的小菌落.挑取单菌落进行革兰氏染色后,镜检发现该菌为典型的革兰氏阳性菌,呈球形、链状排列.
3 玻板凝集试验
将1.0mL分离菌培养物进行离心处理,5000r/分钟离心2分钟,弃上清后沉淀,用100μL的灭菌PBS重悬作为凝集抗原,取20μL凝集抗原与等体积的猪链球菌2型标准阳性血清进行玻片凝集试验,发现试验分离株与阳性血清出现显著凝集现象,同时设立的阴阳性对照结果也都成立.
4 生化反应实验
为了进一步确定分离菌是否为猪链球菌,又进行了生化反应实验.将该分离菌分别接种于各个细菌生化微量反应管,观察生化反应特点,结果显示该菌发酵蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖等,而且产酸不产气,不能发酵木糖、甘露醇和山梨醇等.红试验和亚甲蓝还原试验结果呈阳性,过氧化氢酶和氧化酶结果呈阴性.
5 药敏试验
经过上述鉴定,最终确定该分离菌为猪链球2型.为了保证有效治疗,对分离菌株进行了常规药物的药敏试验.首先将菌株接种于4%牛血清的TSA平板上,然后将阿莫西林、头孢噻肟、氟苯尼考、青霉素、链霉素、氨苄西林、庆大霉素和环丙沙星共8种药敏片平贴于培养皿上,37℃培养24小时后,根据各个药敏片的抑菌圈直径进行结果判定.结果表明该菌株对不同抗生素的敏感程度差异很大,对阿莫西林和氨苄西林呈高度敏感,对头孢噻肟、氟苯尼考和环丙沙星呈中敏,对庆大霉素、青霉素和链霉素耐药不敏感.已将药敏试验结果反馈给相关养殖企业,并指导合理用药治疗,取得了很好的效果.
6 分析与讨论
经过调查发现,该猪场此次疫情的发生是由于近期天气骤变、管理不当和圈舍清理不及时,导致猪群抵抗力下降,致使链球菌感染体弱的猪只,通过传染后使得疫情进一步扩大.本次所分离的链球菌经鉴定是链球2型,是我国普遍流行的菌株.分离培养致病性猪链球菌时,对营养和温度等条件要求比较高,通常需要在添加4%血清或鲜血或适量的葡萄糖等物质的营养培养基才可良好生长,最适培养温度为37℃,培养时间为18~24小时左右,培养基上可见透明、圆形、隆起和表面光滑的灰白色小菌落.因为抗生素药物是治疗细菌类疫病的首选药物,所以抗生素药物在养殖场中广泛应用,但是由此引发了严重的耐药性问题.通过本次药敏试验可以看出,分离菌对不同药物的敏感程度不同,这就与该养殖场日常不合理使用抗生素有关.为了发挥抗生素的最佳效果,必须严禁抗生素的滥用和错用,治疗细菌性疾病的过程中,最好在进行药敏试验的基础上选择药物,开展科学合理的抗生素治疗方案,并且日常预防和保健时应避免长期使用一种抗生素类药物.
猪链球菌对外界环境的抵抗力较强,可长期存活在粪便、尘土和水等介质中.但是猪链球菌为条件性致病菌,所以养殖场的日常饲养管理尤为重要,要做好各方面的管理工作.首先要保证猪舍内合理的饲养密度,保持干燥,定期通风换气,消灭场区内虫鼠害,每天进行圈舍清洁卫生清理工作,并定期彻底消毒.其次饲喂营养价值高的全价饲料,配合适量的青绿饲料,通过饮食提高猪群的抗病能力.季节更替时一定要做好防寒保暖工作,制定适合本场的免疫程序,选用正规厂家的疫苗科学免疫.通常每年春秋季节选用猪链球菌铝胶苗进行常规预防免疫,仔猪可在30日龄左右接种,45~60日龄进行强化免疫一次,免疫后有条件的养殖场可定期开展猪链球菌病血清学监测工作.此外在饲料和饮水中按一定比例添加抗生素类药物,也可以有效预防猪链球菌病的发生,但是在药物预防过程中需要避免耐药性的产生.及时隔离疑似猪链球菌病病猪,并积极治疗,被污染场地、环境、器具、病死猪和粪便等彻底消毒或无害化处理,坚决淘汰带菌病猪.
当前猪链球菌病是制约全世界养猪业的主要细菌性传染病之一,严重威胁着养猪业的健康快速发展,同时猪链球菌也可感染人类,存在潜在的公共安全问题.近年来猪链球菌病有广泛流行的趋势,除单独感染发病外,还与其他猪病如猪瘟、猪蓝耳和猪圆环等多种病毒病混合感染,使疫情更加严重、复杂.猪链球菌的血清型众多,现有疫苗保护还没有达到理想状态,链球菌病的防治工作仍然十分严峻,故加强日常饲养管理还是重中之重.安全、高效、广谱的猪链球病疫苗还有待进一步研制,这对提前预防和控制猪链球菌病具有重要的现实意义.
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