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免疫PCR技术在生牛乳抗生素快速定量检测中的应用
摘 要：近年来,我国对乳制品的消费持续上升.然而,我国奶牛患炎比例高达近50%,目前主流的治疗方法是直接将抗生素注射至奶牛的乳腺中.在众多检验方法中,免疫PCR 法具有相对于传统检测方法更精确和更快速的优势.基于此,本文主要介绍免疫PCR 检测牛乳中抗生素的原理、设计思路、使用说明和优缺点.
关键词：生牛乳；抗生素残留；定量检验；免疫PCR
Abstract：In recent years, China’s consumption of dairy products continued to rise. However, China’astitis ratio up to nearly 50%, the current mainstream treatment directly to the antibiotics to cow’s breast.In numerous tests, immune PCR method is compared with the traditional testing method is more accurate andfaster the main advantage. Based on this, this paper mainly introduced the principle, design idea, operationinstructions and advantages and disadvantages of the detection of antibiotics in milk by immune PCR.
Key words：Raw milk; Antibiotic residue; Quantitative test; Immune PCR
中图分类号：TS252.7
1 背景意义
近年来,我国国民奶制品摄入量持续上升.据统计,2015 年全国乳制品行业累计完成产量3 755 万t,2015 年人均牛奶消费量28.88 kg[1].现今,预防和治疗奶牛炎的主要方法是将抗生素直接注入患病乳牛中或者投放到饲料中[2],而这样做会导致β- 内酰胺类中以青霉素为主的残留抗生素残留在牛乳中[3].人们饮用这样的奶制品后,也会吸收其中残留的抗生素,人们长期饮用“有抗奶”就相当于经常低剂量服用抗生素,会导致人体耐药性增强,免疫力下降,体内环境平衡紊乱或菌群失调[4].农业部发布实施了《无公害食品 生鲜牛乳》行业标准,标准明确指出“抗生素不得检出”[5].因此,在回收生牛乳后确定生牛乳中抗生素的残留量是否符合当下国家标准,对保护人们的健康安全异常重要,不可忽视.
目前,在牛乳抗生素残留方面应用较多的理化分析法有高效液相色谱法、液相色谱- 质谱联用技术、微生物法及免疫分析法[5].微生物法不易筛选到特别敏感菌株、缺乏特异性、多数分析周期较长.高效液相色谱法前处理繁琐、样品回收率不高,分析费时,不能同时检测大量样品[6].1992 年,Sano[7] 等人将免疫测定技术与PCR 结合,创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术——免疫PCR.免疫分析技术具有突出的优点：取样量小,前处理较简,可达到ng 或pg 级别[5].
2 方法原理
IPCR 的基本原理与ELISA 基本相似,是把PCR和抗原抗体相结合的抗原检测技术,是由聚合酶链式反应的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合而形成的检测技术[8].不同的是,该技术可将一段可扩增的DNA 分子代替ELISA 中的酶促反应信号,用一段特定的双链或单链DNA 来标记抗体[9],并且通过抗体- 生物素- 亲和素桥梁将DNA 标记物与目的蛋白连接起来[10],用荧光定量PCR 扩增抗体所连接的DNA,在PCR 扩增后,借助ELISA 反应原理,使用酶标抗体,在微孔板上进行固相杂交来实现定量[11].
3 设计思路和步骤
在免疫PCR 技术反应体系中,可分为3 大主要步骤：①包被,将已知抗体植入微板中以制备捕捉抗原的包被微板.②桥联,将抗体和标记物结合,利用桥联系统将异源DNA 与抗体进行偶联.③结果显示,将DNA 标记物进行扩增后,利用标准曲线可定量分析得到检测结果.
4 优缺点
4.1 优点
免疫PCR 技术结合了ELISA 的高特异性和PCR的高灵敏性,可以检测一系列可以分析的靶标,而且将检测的灵敏度提高了几个数量级,这在很大程度上解决了微量检测问题,可以更加精确地检测出牛奶中抗生素的含量.
4.2 缺点
免疫PCR 的敏感性和特异性使其很容易受到环境及操作的影响,可能出现假阳性现象,并且会出现重复性差和不易标准化的问题.此外,免疫PCR 的操作步骤比ELISA 法和PCR 法都要复杂,而且对操作步骤和仪器的要求较高.
5 结语
免疫PCR 相对单纯的PCR 和ELISA 具有更加灵敏的特性,并且使用免疫学方法可以更加快速地对牛乳中的抗生素进行检测,相对于液相色谱、液质联用等大型仪器分析设备更为简便.同时,此方法也有需改进的地方,如如何降低假阳性发生的概率等.在将其进行优化改进后,利用免疫PCR 方法对牛乳中的抗生素进行检测可以更加快速便捷、准确.因此,对免疫PCR 的研究具有积极的意义.
抗生素论文范文结:
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