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植物病原菌快速检测技术方法
植物病害是限制农作物产量和品质的主要因素之一.在农作物种植前或收获后进行植物病原菌检测,不仅可以对病害进行提前预警,也可以检测农产品的品质.传统的植物病原菌分子生物学检测方法往往需要在实验室进行,并且需要借助多种专业的仪器设备.为了在田间或其他现场能够对病原菌进行快速定量检测,利用便携且操作简单的仪器设备进行病原菌检测显得尤为重要.经过分析发现,环介导等温扩增（LAMP）,是近年来兴起的一种新的聚合酶链式扩增反应体系,这种方法只需要一个恒定的反应温度,所使用的反应仪器简单.
1 试验材料待检测的病原菌包括禾谷镰刀菌、肿囊腐霉菌、弯孢叶霉菌和玉蜀黍黑粉菌.阴性对照为去离子H2O.2 试剂和仪器设备试验试剂包括反应DNA扩增试剂盒（广州迪澳生物科技有限公司）.每种病原菌对应一套LAMP引物,每套引物均由6 条引物组成.
反应在广州双螺旋基因科技有效公司生产的ZYDS1荧光恒温扩增仪器（见图1）上进行.反应温度设定为63 ℃,反应时间设定为45 min.反应结束后,根据仪器自带的程序判断反应结果.
图1 ZYD-S1荧光恒温扩增仪器3 试验方法和结果禾谷镰刀菌、肿囊腐霉菌、弯孢叶霉菌和玉蜀黍黑粉菌的DNA和去离子H2O分别作为反应的模板配制反应体系.反应管在ZYD-S1加热模块上的布局如图2 所示：阴性对照（A1/B1,A6/B6,A7/B7,A8/B8）,禾谷镰刀菌（A2/B2）,肿囊腐霉菌（A3/B3）,弯孢叶霉菌（A4/B4）和玉蜀黍黑粉菌（A5/B5）.反应完成后,根据反应自带程序产生的扩增曲线图可以看出：所有的阴性对照均没有有效扩增,而4 种植物病原菌均产生有效的扩增（见图3）.这就表明LAMP体系能够准确、快速地检测出植物病原菌.
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4、现造技术论文