HPLC论文范例 和HPLC法测定桑姜感冒片中苦杏仁苷的含量方面论文例文

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HPLC法测定桑姜感冒片中苦杏仁苷的含量

【摘 要】目的:建立测定桑姜感冒片中苦杏仁苷含量的方法.方法:采用高效液相色谱法测定,使用C18 柱(Symmetry5um,4.6mm×250mm),柱温40℃,以乙腈- 甲醇-0.1% 磷酸溶液(10:8.5:81.5)为流动相,检测波长210nm;流速为0.4ml/min.结果:苦杏仁苷进样量在0.1281ug~1.2812ug 范围具有良好的线性关系;苦杏仁苷平均回收率为100.3%,RSD 为1.03%.结论:高效液相色谱法灵敏度高,重复性好,所建立的苦杏仁苷含量测定方法能有效提高桑姜感冒片的质量控制.

【关键词】桑姜感冒片;苦杏仁苷;HPLC;含量测定

桑姜感冒片收载于《中华人民共和国药典》一部,2015 年版.由桑叶、连翘、菊花、苦杏仁、紫苏叶、干姜六味药组成,具有散风清热,宣肺止咳的功效,临床用于外感风热,痰浊阻肺所致的感冒[1].其中苦杏仁为其主药之一,其主要有效成分苦杏仁苷具有降气止咳平喘的功效.有研究表明, 苦杏仁苷在酶或酸性条件下, 能分解成具有抑制中枢神经系统的氢氰酸, 形成组织缺氧等中毒反应[2],严重的可危及生命.标准中只采用高效液相色谱法对其进行鉴别,并无含量控制指标,鉴于苦杏仁苷过量摄入会引发中毒,量少又难以保证药效,为了保证病人的用药安全,本文拟采用高效液相色谱法测定桑姜感冒片中苦杏仁苷的含量,为桑姜感冒片质量标准的提升和完善提一定科学依据.

1 实验部分

1.1 仪器与试药

1.1.1 实验材料

苦杏仁苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号110820-200403);桑姜感冒片(四川好医生攀西药业有限责任公司,批号:160106);缺苦杏仁的阴性样品自制.

1.1.2 实验试剂

乙腈(色谱纯);甲醇(色谱纯);磷酸(分析纯);水为自制超纯水.

1.1.3 实验仪器

Waters e2695 高效液相色谱仪;2998PDA Deteator 检测器;AY120 电子天平(SHIMADZH);AG135 电子天平(梅特勒- 托利多);PS-40A 型超声清洗机(东莞市洁康超声波有限公司).

1.2 方法与结果

1.2.1 色谱条件

Symmetry 柱(C18,4.6×250 mm,5um);流动相:乙腈- 甲醇-0.1% 磷酸溶液(10:8.5:81.5);检测波长210 nm ;流速0.4 ml/min;柱温:40℃.

1.2.2 供试品溶液的制备

取本品粉末约0.5g,精密称定,置具塞容量瓶中,精密加入20ml 甲醇,密塞,称定重量,超声处理30min,放置室温,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得.

1.2.3 对照品溶液制备

精密称取苦杏仁苷对照品16.0150mg,置50ml 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液,精密量取上述贮备液1ml 置5ml 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液.

1.2.4 系统适用性试验

分别取苦杏仁苷对照品溶液、供试品溶液和缺苦杏仁的阴性空白溶液注入液相色谱仪,记录色谱(见图1~3)从图中可见,阴性空白色谱图在苦杏仁苷位置处无干扰峰,苦杏仁苷和其他相近的峰完全分离(分离度>1.5),理论塔板数以苦杏仁苷计算不低于4000.

1.2.5 线性关系考察

分别精密吸取苦杏仁苷对照品贮备液(0.3203mg/ml)0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml 到5ml 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,按上述色谱条件测定,以峰面积为纵坐标,苦杏仁苷进样量(ug)为横坐标绘制标准曲线,得回归方程:y(苦杏仁苷)等于2E+06x - 46059,r等于0.9999; 苦杏仁苷进样量在0.1281ug~1.2812ug 范围内与峰面积具有良好线性关系.

1.2.6 精密度试验

精密吸取苦杏仁苷对照溶液(0.06406mg/ml)10 ul,分别进样5 次,苦杏仁苷峰面积相对标准偏差(RSD)为0.36%,结果表明精密度良好.

1.2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液,分别于0、2、4、6、12 小时进样10ul,苦杏仁苷峰面积RSD为1.00%,说明溶液在12 小时内测定稳定.

1.2.8 重复性试验

取同一批次供试品5 份(160106),按2.2 项下操作制得供试品溶液,按2.1 项下色谱条件进样分析并记录峰面积,计算得每片含量依次为0.7615、0.7515、0.7585、0.7465、0.7366 mg,RSD 为1.33%, 结果表明本方法重复性良好.

1.2.9 回收率试验

取6 份已知含量的同一批样品(160106) 各约0.25g,, 精密称定, 置25ml 容量瓶中,加入适量对照品贮备液,按2.2 项制备供试液,按2.1 色谱条件进样,记录峰面积,计算回收率,结果平均回收率为100.3% ,RSD 为1.03%.(见表1)

1.2.10 样品含量测定

依法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10ul,注入高效液相色谱仪,按上述方法测定,样品(160106)含苦杏仁苷为每片0.7509mg,桑姜感冒片平均片重为0.2650g.

2 结论与讨论

(1)在试验过程中,参考有关资料笔者曾先后采用甲醇- 水(18:82), 乙腈-0.1% 磷酸溶液(8:92)等作为流动相,结果发现采用乙腈- 甲醇-0.1% 磷酸溶液(10:8.5:81.5)作为流动相时,样品中待测成分峰形较好,与相邻峰的分离度达到要求,阴性样品中其他成分对待测成分无干扰.

(2)由于样品中成分较多,试验中发现在连续进样时,样品可能会出现峰形堆叠,影响苦杏仁苷峰形,可通过适当延长进样时间改善.

参考文献

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京: 中国医药科技出版社出版社,2015:1463.

[2] 陈将, 叶亚丽, 陈锷锐. 高效液相色谱法测定桑菊饮中苦杏仁苷的含量[J]. 中国中医药科技2014,21(2):172-173.

作者简介

陈远(1986-),男,贵州省贵阳市人.大学本科学历.助理工程师.现供职于毕节市食品药品检验所.

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