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成都地区犬大肠杆菌的分离鉴定与药物敏感性试验

大肠杆菌是人类和动物常见的肠道微生物,在维持肠道正常生理机能上起重要作用,也是引起多种疾病的病原体,包括胃肠、泌尿道的感染和败血症,给人和动物的生命带来威胁.在物质生活极丰富的现今社会,随着生活结构的转变,越来越多的人将情感寄托在宠物身上,他们已经把宠物作为家庭的一员,而宠物中尤以犬最多.犬大肠杆菌病的治疗方法很多,关键是要早发现、早治疗,治疗常用抗生素和磺胺类以及其它消炎止泻的药物.近年来,抗菌药物的广泛使用和运用不当或者是滥用的情况,引起大肠杆菌的耐药菌株越来越多,因为大肠杆菌对药物的选择压力很敏感,易产生耐药性,使得临床工作者对这类疾病的防治越来越难.本试验通过对成都市宠物医院和宠物市场采集的犬粪便样品做分离、培养、纯化、生化鉴定大肠杆菌,并进行药敏试验研究,为临床选择抗菌药物治疗犬大肠杆菌病和耐药性监测提供有力依据.

一、材料和方法

1. 材料

(1)样本

2010 年采自成都市2 家宠物医院和2 个宠物市场的犬粪便,犬的种类分别为贵宾,博美,松狮,北京犬,牧羊,萨摩耶,哈士奇,藏獒,犬等,年龄在30 日龄到十岁不等.

(2)药物

头孢曲松购自中诺药业有限公司,庆大霉素购自郑州铃锐有限公司,妥布霉素购自太极集团西南药业,左旋氧氟沙星购自德阳华庚药业有限公司,小诺霉素购自江西制药有限公司,氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶购自南京金盾药业有限公司,林可霉素购自江苏吴中药业有限公司.

2. 方法

(1)大肠杆菌的分离和鉴定

参考文献方法,将纯化后的革兰氏阴性短杆菌的单菌落,接种于LB 肉汤,37 ℃ 培养16 ~ 18 h, 取菌液5 ~ 10μl, 接种于肠杆菌科细菌生化编码微量鉴定管中,氨基酸和氨基酸对照滴加石蜡1 ~ 2 滴,37℃培养24 h 后,对菌株的生化结果进行判断并编码,按编码值检索肠杆菌科细菌生化编码表进行细菌鉴定.

(2)药敏片的制作

将定性滤纸用普通打孔器打成直径为6 mm 的圆形纸片, 取800片分别放入8 个干燥的小瓶中(每瓶100 片),以单层牛皮纸包扎好,115 ℃ 高压灭菌20 min 后, 置于37℃培养箱中数天使其完全干燥;在操作台中,按照100 片纸片吸收0.4μL 水的比例加入配好的药液400μL ;不时翻动纸片,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30 min即可,同时记录药物名称,于37℃培养箱中过夜.

(3)药物敏感性试验

采用纸片扩散法进行药物敏感性检测,按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的操作程序进行,参照CLSI 的标准判断耐药、敏感或中介,同时用大肠杆菌ATCC25 922 作为质控菌株.质控菌株大肠杆菌由西南民族大学药理实验室提供

二、结果

1. 大肠杆菌的分离和鉴定

从200 个样本分离鉴定大肠杆菌145 株,每只动物仅分离1株大肠杆菌.

2. 药敏试验结果

145 株大肠杆菌对8 种抗菌药物的耐药情况见表1.如表1 所示,大肠杆菌对8 种抗菌药物的耐药率都高,其中对林可霉素耐药率最高,达到84.7%,对左旋氧氟沙星的耐药率为80.0%,对其余6 种药物耐药率也超过50%,对头孢曲松、庆大霉素、妥布霉素、小诺霉素、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶的耐药率分别为57.9%、67.6%、72.4%、、63.4%、79.3%、和56.6%.

145 株分离的犬大肠杆菌全部对至少3 种药物耐药,除7 株大肠杆菌对3 种抗菌药耐药外,其余138株对4 种以上抗菌药有耐药性,有26 株大肠杆菌同时耐8 种药物.4种药物耐药菌株为33 株(22.76%),5 种药物耐药菌株为7 株(4.83%),6 种药物耐药菌株为46 株(31.72%),7 种药物耐药菌株为26 株(17.93%).

三、小结

国内已有关于宠物源细菌耐药性的报道,不同地区的宠物源细菌耐药情况不同,但耐药细菌呈现多重耐药,并且对抗菌药的耐药呈上升趋势.本研究药敏试验结果表明,分离的犬大肠杆菌对多种抗菌药物产生耐药性,其中大肠杆菌对头孢曲松、庆大霉素、左旋氧氟沙星和氟苯尼考的耐药率高于相关文献报道,也远远高于欧美国家对宠物源细菌耐药性调查结果.

目前,动物源细菌耐药性问题已引起全世界的广泛关注,中国、美国、加拿大、丹麦、日本、韩国、欧盟等国家建立了细菌耐药性监测系统,但我国只对食源动物细菌耐药性监测.犬作为伴侣动物,与人接触亲密,他们共同生活的环境是细菌传播的条件,犬作为细菌储存库,是细菌传播的中介.已报道的美国有一病例,宠物主人被有抗菌药物治疗史的犬咬后,发现感染了来自犬的多重耐药大肠杆菌,也有研究证实从一3 岁儿童分离的大肠杆菌与从他家腹泻犬分离的大肠杆菌完全一致,还有就是人源氟喹诺酮类药物耐药猪霍乱沙门氏菌来源于猪,表明食源动物和人,宠物与人之间发生了耐药菌株的克隆传播,说明耐药菌株可将耐药基因转移至人体引发疾病,对人体健康构成潜在危害.因此相关部门应重视宠物耐药性问题,加强宠物临床抗菌药物应用的监督,制订药物使用规范,以指导临床合理用药.

参考文献(略)

鉴定论文范文结:

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