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饮用天然矿泉水中粪链球菌检测的能力验证
摘 要：本文主要考查本实验室检测人员对矿泉水中粪链球菌的检测能力.方法：用本实验室标准工作菌株粪链球菌制成合适麦氏浊度的菌悬液,污染待检包装矿泉水,后续按照国标GB 8538-2016 56部分进行检测和鉴定,检测过程设置阴性对照大肠埃希氏菌.结果：两名检测人员检测结果分别为33 CFU/250 mL、21 CFU/250 mL,其对数值之差的绝对值为0.20．小于0.45.结论：本次人员比对考核结果为满意.
关键词：矿泉水：能力验证：人员比对：粪链球菌
检测人员能力验证是实验室微生物检测质量控制的关键环节,其结果直接关系到检验报告的准确性和可靠性.通过能力验证,可以综合判断检测人员的检测水平,进而体现该实验室的检测水平.能力验证作为评价实验室能力的一个重要手段,一直以来受到国内外实验室管理者的广泛重视.它对于实验室而言是重要的外部质量保证手段,能增加客户及相关方对实验室出具可靠数据的信心.
粪链球菌(Streptococcus faecalis),又名粪肠球菌(Enterococcuaecalis),在水、土壤和人畜的体内及粪便中广泛存在,属于条件致病菌,当机体抵抗力下降或有其他因素影响时,进入人体血液或其他部位,可引起尿路感染、败血症、脑膜炎、化脓性腹部感染、心内膜炎和腹泻发烧等.该菌耐热、耐盐,对不利环境的适应性强、抵抗力强,甚至可以抵抗多种抗生素,因此存活力持久、感染性强,与大肠菌群相比,该菌更适合作为水质粪便污染情况的指标菌,更能客观地反映水质的卫生状况.本文就包装矿泉水中粪链球菌的定量检测对本实验室两名检测人员进行能力验证.
1材料与方法
1.1实验菌株
粪链球菌(Streptococcus faecalis)ATCC29212,购自广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心,工作菌株为3代,大肠埃希氏菌(Escherichia coli)At℃C25922购自Microbiologics,工作菌株为2代.
1.2主要试剂与仪器
KF链球菌琼脂培养基（北京陆桥）、脑．心浸萃液态培养基（北京陆桥）、脑．心浸萃琼脂培养基（北京陆桥）,抽滤设备(Millipore)、无菌滤膜(Millipore)、恒温培养箱（上海一恒）、旋涡混合器(IKA).
1.3检验方法
1.3.1制备菌悬液
用无菌棉签沾取粪链球菌阳性菌株至3mL生理盐水管中,测定麦氏浊度,并进行稀释.
1.3.2 阳性污染
各吸取1mL菌悬液至250 mL矿泉水中,混匀.
1.3.3过滤
用无菌镊子夹取0.45μm无菌滤膜至滤床上,固定好无菌滤器,将250 mL污染样品倒入无菌滤器中,启动抽滤装置,完成后将滤膜转移到KF链球菌琼脂培养基上,注意放置时要避免在滤膜和培养基之间夹留有气泡,
36℃倒置培养48 h.
1.3.4计数
记录典型菌落数,粪链球菌在KF链球菌琼脂培养基上呈红色或粉红色菌落.
1.3.5镜检
分别挑取不少于5个典型菌落进行革兰染色,首先挑取菌落涂薄片,用酒精灯灼烧片刻固定,后用结晶紫染色1 min,自来水冲洗,碘液媒染1min,自来水冲洗,95%酒精脱色30 s,自来水冲洗,沙黄复染1 min.粪链球菌为革兰氏阳性球菌,常排列成短链状.
1.3.6确证试验
同时接种到脑．心浸萃琼脂培养基,36℃培养48 h,若有菌生长,进行3%过氧化氢酶试验,若无气泡产生,则转接到脑．心浸萃液态培养基及胆汁液态培养基中,分别于45℃、36℃培养48 h、3d,观察是否能生长繁殖.粪链球菌为过氧化氢酶阴性,在上述培养基中均能生长.
2结果
2.1样品污染
菌悬液麦氏浊度为0.51,稀释6倍,各吸取0.7 mL至250 mL待测矿泉水中.
2.2计数
检测人员A所做的KF平板上典型菌落数为33个,检测人员B所做的KF平板上典型菌落数为21个.
2.3镜检
检测人员A挑取的5个典型菌落均为革兰氏阳性球菌,并排列成短链状检测人员B挑取的5个典型菌落均为革兰氏阳性球菌,并排列成短链状.
2.4确证试验
检测人员A挑取的5个典型菌落在脑．心浸萃琼脂培养基上有生长,3%过氧化氢酶试验阴性,在脑．心浸萃液态培养基及胆汁液态培养基中均能生长繁殖；检测人员B挑取的5个典型菌落在脑．心浸萃琼脂培养基上有生长,3%过氧化氢酶试验阴性,在脑．心浸萃液态培养基及胆汁液态培养基中均能生长繁殖.
2.5结果与报告
检测人员A的检测结果为33CFU/250 mL,检测人员B的检测结果为21CFU／250 mL.
3结论
两次独立试验的对数值之差的绝对值为0.20,小于0.45,结果为满意,表明A、B检测人员检测矿泉水中粪链球菌的能力符合质量控制要求.
4讨论
水为生命之源,在人的生命活动中不可或缺.但随着工业化的普及,饮用水的安全问题变得越来越突出,而其中最重要的问题之一便是饮用水的微生物污染,饮用水一旦受到污染,将会引起大规模感染和疾病的爆发嘲.
大肠菌群定植于人及温血动物的肠道中,通过肠道排泄物污染水质,进而传播疾病,但经过氯消毒、污水处理和高浓度盐的环境中,大肠菌群可能多数已失活,所以大肠菌群并不能很好地反映水质的粪便污染情况.而粪链球菌的抵抗力强于大肠菌群,将粪链球菌作为衡量水质卫生质量的指标菌更具有卫生学意义,现行有效的国家标准《饮用天然矿泉水检验方法》(GB8538-2016)将粪链球菌纳入检验指标菌.李飞等研究人员在广东省采集206份水样,开展粪链球菌的污染调查,调查显示有35份水样有粪链球菌污染,污染率为17%,因此饮用水中卫生指标菌粪链球菌(Streptococcus faecalis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等的监测至关重要.
开展此次能力验证,旨在考核本实验室试验人员的检测能力,找出检测过程的薄弱之处,发现问题,解决问题,提高实验室检测人员对食品微生物检验和细菌性疾病诊断的应急能力,促进实验室检验水平的不断提高.本实验室还将有序地进行其他食品微生物检验的能力验证,以保证本实验室检测人员稳定的检测水平.
矿泉水论文范文结:
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