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白与组培苗繁育组织继代培养
1洛宁县竹林研究所,河南洛宁471700；2洛宁县林业调查规划设计队；3洛宁县林业技术工作站；4河南绿普森农林科技有限公司）
摘 要院以白及种子进行试验,用控制变量法进行数据分析,着重研究并筛选白及组培苗增殖的最佳培养基配方及培养程序,建立白及快繁技术体系.结果表明：在生长素及细胞分裂素类似物低浓度时,对白及苗生长情况KT+NAA 组合促进效果好,6-BA+NAA 效果次之,2,4-D+6-BA 组无明显生长.当细胞分裂素/ 生长素浓度调控到1.5mg/L+0.5mg/L时,发现KT+NAA 组生长得最好,苗叶翠绿；而6-BA+NAA 长势比起1.mg/L+0.5mg/L 略枯萎,在该浓度下,白及苗不适宜生长.
关键词院白及；组培苗培养；6-BA；KT；培养基
1 材料与方法
1.1 材料处理
用酒精棉球将未开裂的成熟白及蒴果表面擦试干净,用0.1%升汞溶液消毒灭菌8min,无菌水冲洗5次,无菌滤纸吸干水分.在无菌超净台上将白及种子接种1/2MS 培养基表面.
1.2 培养基
培养基为MS培养基,分别添加试验组所需生长调节剂置于培养瓶中,高压灭菌锅121℃灭菌30min,冷却备用.1.2.1 出苗前：1/2MS+NAA0.1mg/L、1/2MS+NAA0.5mg/L、1/2MS+NAA1.0mg/L 3种培养基,分别添加蔗糖3%、琼脂1%、pH值5.8～6.0.每个处理15瓶,每瓶30mL.高温、高压灭菌后冷却备用.无菌接种,待种子萌发月余,用无菌镊子夹取白及小苗,进行继代培养.
1.2.2 出苗后：首先记录下各组继代之前白及芽苗的叶长记为C继代前,28天后记录下试验处理下的叶长C 处理,由此可得白及芽的叶生长率K白及叶.计算公式如下：
K 白及叶等于（C 处理-C 继代前）/C 继代前×100%1.3 处理方法
（1）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L、MS+6-BA1.5mg/+NAA0.5mg/L.
（2）MS+6-KT0.5mg/+NAA0.1mg/L、MS+KT1.0mg/+NAA0.2mg/L、MS+KT1.5mg/+NAA0.5mg/L 3种培养基.
（3）MS+6-BA0.5mg/+2,4-D 0.1mg/L、MS+6-BA1.0mg/+2,4-D 0.2mg/L、MS+6-BA1.5mg/+ 2,4-D 0.5mg/L 3种培养基,其中分别添加蔗糖3%,琼脂1%,pH值5.8～6.0.
培养基中分别添加蔗糖3%,琼脂1%,pH值5.8～6.0.每个处理15瓶,每瓶接种20株小苗.
2 结果与分析
2.1 不同浓度的6-BA、NAA对白及愈伤组织继代培养的影响
从接种过白及芽28天后,芽愈伤组织已渐渐显现出差别.当6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L时,白及小芽纵向生长旺盛,光合作用范围较大,但叶片窄而细长不利于植株的营养积累.
当6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L时,白及芽苗生长茂密,且接种的芽都有旺长的趋势,叶宽而翠绿非常有利白及芽苗的营养积累.
当6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L时,白及生长又发生衰退之势,接种20棵小芽都有小幅度生长,但芽叶没有明显旺长反而有萎靡不振的趋势,说明此时的NAA 浓度对白及苗芽有轻微的抑制作用.
从数据表1中可以得到,6-BA+NAA 组合对白及愈伤组织继代培养的积极作用浓度：6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L＞6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L＞6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L.
2.2 不同浓度的KT、NAA对白及愈伤组织继代培养的影响接种28天后,白及芽愈伤组织发生了形态上的完全变化：
2.3 不同浓度的2,4-D、6-BA对白及愈伤组织继代培养的影响
白及芽苗在培养瓶中生长28天后,白及芽生长形态没有太大的变化,白及芽苗仅生长了1cm多,但接种的每瓶20株小芽都没萎缩枯死,说明白及苗芽在2,4-D+6-BA的作用下,白及苗芽不适合在该浓度下叶生长,但没死亡说明本试验中2,4-D+6-BA的浓度对白及苗芽只有抑制作用.
2.4 不同激素及同浓度配比对白及愈伤组织继代培养的影响
同种激素不同浓度的组合已作出结果分析,但具体哪一个才是白及愈伤组织继代培养的最佳方案,现下进行同浓度不同激素的配比来进行筛选,得到的结果如下：
2.4.1生长素及细胞分裂素类似物低浓度时.对白及芽苗生长情况KT+NAA 组合促进效果好,6-BA+NAA 效果次之,2,4-D+6-BA组无明显生长；在这组NAA 0.1mg/L前提条件下,6-BA与KT进行比较可知,KT对白及苗的生理活性作用强于6-BA.
2.4.2. 浓度达到1.0mg/0.20mg 时.情况发生变化,6-BA+NAA 组的苗长势良好,KT+NAA 组的生长趋势稍次之,2,4-D+KT生长不明显；说明6-BA+NAA 组合对白及苗增殖生长的最佳浓度处在1.0mg/0.5mg徘徊；但KT+NAA组的长势仍＞6-BA+NAA..
2.4.3生长素和细胞分裂素类似物浓度达1.5mg/0.5mg时.KT+NAA 搭配组对苗的生长有明显的辅助效果,6-BA+NAA的壮苗长势不明显,2,4-D+6-BA几乎停滞不前.3 组中,2,4-D+6-BA 组合对白及苗的生长促进作用甚微,KT+NAA组合增强植株的生存能力最佳,NAA 0.5mg/L+KT 1.5mg/L配合为白及苗增殖的优良方案.
3 讨论
白及组培繁育继代培养的关键是生长素和细胞分裂素的比例,其次才是所加添加剂的类别,在低浓度时,6-BA+NAA作用效果最好且易于控制；浓度升高时,NAA作用的抑制效果显现出来,而KT+NAA没有此作用,KT可通过增强植株代谢缓解NAA的副作用,故KT+NAA可作为高浓度下的良好选择；2,4-D+6-BA 搭配中白及苗对2,4-D 敏感,起抑制作用,且对苗来讲有轻微的毒性.KT+NA 组合增强植株的生存能力最佳,NAA 0.5mg/L+KT 1.5mg/L 为白及组培繁育继代培养的优良培养方案.
参考文献
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（责任编辑王曼）
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