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月饼中菌落总数测定结果不确定度的评估
摘 要：本文旨在建立月饼中茵落总数检测结果的不确定度的评定方法.方法：依据GB4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物菌落总数测定》进行测定和结果判断,再根据F1059.1-2012《测量不确定度评定与表示的规定》以及参考其他相关文献,对本实验室菌落测定过程引入的不确定度进行分量评定.结果：依据所采用的方法,得出两份样品结果分别为(1.6~1.8)×l03CFU/g (k等于2)和(2.6~2.8)×l03CFU/g (k等于2).结论：本文所采用的评定方法,是对月饼中菌落总数加测结果不确定度的评定方法,也可以应用于日常工作中其他产品的菌落总数不确定度评定.
关键词：月饼：菌落总数：不确定度：评估
月饼是使用面粉等谷物粉、油、糖或不加糖调制成饼皮,包裹各种馅料,经加工而成,在中秋节食用为主的传统节日食品.其微生物污染指标深受广大民众关注,菌落总数主要作为判定样品被污染程度的标志,所以对菌落总数的测定及不确定度的评估极其必要.一切测量结果都不可避免的具有不确定度,菌落总数测定也具不确定度.本文依据F1059.1-2012《测量不确定度评定与表示的规定》GB4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物菌落总数测定》对月饼菌落总数不确定度进行评估.
1材料与方法
1.1材料
本次实验两份样品为市售购买,分别设为S,和S2.
平板计数琼脂（北京陆桥技术股份有限公司）、立式压力蒸汽灭菌器（立德泰勃科学仪器有限公司,型号LT-CPS80C)、全自动隔水恒温培养箱（上海智城分析仪器制造有限公司,型号ZGP-2080)、电热鼓风式恒温干燥箱(重庆试验设备厂,型号CS101-1EB)、电子天平(1/100) (上海恒平科学仪器有限公司,型号MP500B)、显微镜(莱卡,型号DM750).
1.2检验方法
1.2.1方法
依据GB4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物菌落总数测定》进行测定,选择菌落总数在30～300CFU/g的稀释度平板来计数.
1.2.2步骤
称取25 g样品置于盛有225 mL生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1～2 min,制成1：10的样品匀液.用ImL无菌吸管吸取1：10样品匀液ImL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管不要触及稀释液面）,换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1：100的样品匀液.按上一步的步骤,制备10倍系列稀释样品匀液.每递增稀释一次,换用1次ImL无菌吸管.选择2—3个适宜稀释度的样品匀液,在进行10倍递增稀释时,吸取ImL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿.同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照.及时将15—20 mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基『可放置于(46&plun;1)℃恒温水浴箱中保温]倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀.待琼脂凝固后,将平板翻转,(36&plun;1)℃培养(48&plun;2)h.选取菌落数在30—300CFU、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数.低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计.每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数.
1.3数学模型的建立及菌落总数的计算
根据GB4789.2-2016,建立菌落总数的计算公式为：N等于∑C／(nl+0.1×n2)×d.其中N为样品中菌落数,∑C为可计数平板菌落数之和,n1和n,为可计数平板的个数,d为第一稀释度.当仅一个稀释倍数的平板菌落数的计数范围内时,n2等于0.
样品S1在10-1稀释度时,平板菌落数分别为178和160,其余均不在适宜计数范围内,则Nsi等于 (178+160)/2×10等于1700.
样品S2有两个稀释度(10-1,10-2)平板菌落数在计数范围内,分别为247、272、35、37,则Nsz等于 (247+272+35+37)／(2+O.1x2)×10-l-2700.
1.4不确定度来源分析及各相对不确定度的推导与计算
由于检测过程中包括收样一取样一稀释一均质一加样一混匀一培养一计数一计算一报告.所以影响因素是比较多的.本文只侧重分析下面几个.
1.4.1稀释度相对标准不确定度
该不确定度与首步10倍稀释和后续连续10倍系列稀释所产生的不确定度相关.每步稀释所产生的相对不确定平方可由下式计算.
1.4.3菌落数相对不确定度
平板上的菌落是由ImL样品稀释液中的细菌经过培养而表现出来的.一般用普松分布(poissonscatter)来表示在一系列等量均分的粒子悬液中粒子数的变化,即普松分布可表示ImL样品稀释液中细菌的不确定度.当选定的某个稀释度的平行检测的两个计数平板上的菌落数均值为N时,普松分布所引起的相对标准不确定度：Rs等于l／N.故S,样品中：
1.4.4菌落计数相对不确定度
为求得菌落计数的相对标准不确定度,本实验对所计数平板进行了二次计数.第一次计数并记录后,对已编码的平板打乱顺序再次计数,两次计数结果见表1.
3讨论
由于菌落总数的测定是由标准方法里面的公式换算而来,所以公式里的每一个因数及检测过程中的每一步骤都会影响其不确定度的结果.本文只是重点推导其中几个必须的影响因素,但是不能说明其他因素没有影响,比如：称量样品重量引入的不确定度.样品质量的不确定地评定可以通过传播的方式来获得,即称量的天平、量筒等.多数人认为样品质量因素不是主要的结果不确定度来源,例如：一个样品菌落总数含量较高时(400 000CFU/g),方法要求取25 g样品进行测试,但实际称取了12.5 g,理论计算此时的结果应该为200 000 CFU/g,两个结果之间的差别比较小,所以认为该因素对结果测量不确定度的贡献比较小.另外,采样方式、均质方法、培养基质量、培养条件、菌落重叠分布、数字修约等也是影响因素,实验人员可以根据自己的实际情况来加以选择.
评估论文范文结:
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